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顯微鏡核心實驗室

MICROSCOPY CORE LABORATORY

  

 


 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
                                      使 用 規 則  

版本:2017.5.26

一般規定:

使用電子顯微鏡觀察紀錄檢體之品質需求
(依「送件注意事項」(MRD-SOP-MC-0010)作業)

  1. 檢體處理需注意的事項:
    1. 生物檢體:
      1. 請至本單位拿取固定液
      2. 取樣時請保存於固定液中且以4℃低溫下盡速送件
      3. 請特別注意組織方向性的問題。
    2. 檢體樣品規格:
      1. 組織:
        1. TEM檢體:組織塊大小需小於2 x 2 x 2 mm3
        2. SEM檢體:組織塊大小需小於2 x 2 x 2 mm3
        3. 上述a.及b.,若為眼角膜與視網膜 (含脈絡膜及鞏膜) 的檢體,因考慮方向性及視網膜容易剝離問題,則不需裁切成前述大小,只要厚度小於2mm 即可。
      2. Cell suspension:106 cells以上。
      3. Attached cells:
        1. 請培養在電顯專用之coverslip 上。
        2. TEM之檢體請提高密度,細胞聚集成cluster為佳。
        3. SEM 檢體細胞之間要有些空隙且成monolayer者為佳。
      4. 自備SEM檢體:
        1. 平面之觀察面需小於直徑2 cm和高2 cm。
        2. 剖面之觀察面需小於長2 cm,高度為 1 cm
        3. 樣品需乾燥且無揮發性。
        4. 拒收含有毒性、腐蝕性、爆炸性、放射性及磁性等之樣品。
      5. 自備TEM檢體:樣品規格為直徑3 mm,厚度0.1 mm,
        薄區或切片厚度約90 nm

試驗流程如需符合ISO17025: 2005規範:

  1. 本中心依「穿透式電子顯微鏡檢體處理標準書」(MRD-SOP-MC-009) ;「製刀機操作標準書」(MRD-SOP-MC-006);「超薄切片機操作標準書」(MRD-SOP-MC-007);「穿透式電子顯微鏡操作標準書」(MRD-SOP-MC-003) ;「配製試劑標準書」(MRD-SOP-MC-011) 執行試驗。
  2. 本中心所使用的主要儀器設備:Hitachi H-7500 穿透式電子顯微鏡、Leica EM KMR2 製刀機、Leica EM UC6 超薄切片機。
  3. 送件樣品為哺乳類動物無特定方向性之組織塊。
  4. 組織塊大小需小於 2 × 2 × 2 mm3
  5. 送件者將檢體取下後:
    1. 放入3% Glutaraldehyde + 2% Paraformaldehyde in 0.1M cacodylate buffer (pH 7.4)中,須避光,且置於4℃冰箱內2小時。
    2. 換上0.5% Glutaraldehyde in 0.1M cacodylate buffer (pH 7.4) ,須避光,於4℃下,送至本中心。
    3. 客戶取檢體前,應先至本中心拿取上述兩種固定液。
  6. 送件者於送件時需詳實填寫「穿透式電子顯微鏡送件清單」(MRD-SOP-MC-016-F01)及「試驗委託單(顯微鏡核心實驗室)」(MRD-SOP-MC-016-F02)。
  7. 如樣品有以下情形者,則不予以收件:
    1. 經0℃以下冷凍過之組織。
    2. 檢體取下後浸泡過其他非本中心提供固定液溶液之組織。
    3. 無法完全浸泡在固定液中的組織(例如:組織塊浮在固定液上)。
  8. 檢體收件時間統一為每周五上午9:00至下午3:00,收件日下個周一視為第一個工作天,發報告時間為20個工作天(如果一次送件超過12個檢體,發報告時間會依比例調整)。

 

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