Page 33 - 林口長庚醫研部電子報-2019年6月刊
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在實驗室的前半年,主要還是在適應環境和學習基本的實驗操
作。近年來教授的實驗室所出的論文一般有三類,第一大類是以大豬
為模型,探討卵子的mtDNA copy number 對卵子品質的影響,第二大
類 是 以 大 豬 和 牛 為 模 型 ,探 討 mICSI和mitochondrial supplement
when spindle transfer對於後續胚胎的發育的影響和其相關機制,
第 三 則 是 探 討 腫 瘤 細 胞 其 mtDNA copy number and DNA
methylation。由於mtDNA copy number是整個實驗室所發的論文的主
要理論基礎,所以前半年的訓練主要是練習如何萃取DNA,PCR放大,
跑膠,純化,做standard,跑qPCR,long PCR,一直到每一個檢體每
次測出來的copy number恆定,我才算是通過了考驗,很枯燥,但是
卻是很扎實的訓練。等到測mtDNA copy number的技術純熟後,我開
始了我的第一個小實驗。
實驗的內容很簡單,就是抽顆粒細胞的RNA看基因表現。這個實
驗我做了快半年,養蛋,拆蛋,測蛋的mtDNA copy number,抽相對
應 的 顆 粒 細 胞 的 RNA , 送 RNA QC , 做 RNA sequence , 做
Bioinformatics analysis。主要是從極少量的細胞抽RNA有一定的困
難度。初步的數據看來,具備不同mtDNA copy number的成熟卵子其
伴隨的顆粒細胞在RNA的表現上並無明顯的差異,顯示卵子的mtDNA
copy number的 減 少 ,還是與卵子本身比較有關。雖 然 是 Negative
finding,但是燒了教授快一百萬台幣。
在澳洲第一個聖誕節過後,整個墨爾本都在瘋狂澳洲網球公開賽
時,我開始練習mICSI。創建mICSI系統的過程中有三個部分的問題需
要克服。第一,豬卵的體外熟成系統和豬胚胎培養條件的建置。第
二,自體卵子粒線體萃取的技術。第三,結合粒線體補充的單一精蟲
顯微注射的技術。由於我們是在墨爾本進行胚胎培養,但胚胎植入是
在阿得雷德大學進行,所以我尚需克服第四個困難,那就是運送胚胎
的環境條件和第五個困難以開腹方式的豬胚胎植入的技術。
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