Page 18 - 林口長庚醫研部電子報-2019年6月刊

10X genomics

4.單細胞定序

以往的次世代定序或是晶片帄台分析mRNA表現均是抽取一群細胞

的RNA藉以分析其表現。然這一群細胞中可能有極為複雜的單一細胞

所組成，如此分析結果可能將一些數量較少的細胞的變化給掩蓋住，

無法得知這些數量較少但可能極為重要的細胞基因變化。為克服這一

點，10X genomics即利用油滴包覆原理，將單一細胞、磁珠與酵素包

覆在油滴當中。隨後將油滴中的細胞破解，細胞中的mRNA即會與磁珠

上的oligo-T與Barcode的引子結合進行反轉錄成cDNA。最後將油滴破

壞後，所有細胞的cDNA製備成基因庫上機。由於每個細胞的cDNA所帶

的Barcode均不同，所以我們只要將相同Barcode的訊號放在一起即可

以得知單一細胞的mRNA表達的量（如圖1所示）。利用10x Genomics

系 統 核 心 實 驗 室 已 成 功 建 立 腫 瘤 與 組 織 微 環 境 的 單 細 胞 基 因 庫

（libraries），再用次世代定序分析（NGS RNA seq），可以解析各

個細胞的基因表達來區分出腫瘤細胞、免疫細胞與其他細胞。

圖：單一細胞定序技術。（A）磁珠結合了oligo-T與Barcode。每一個磁

珠Barcode均不相同，故可以區分mRNA的來源。（B） 磁珠與單一細胞包
覆於油滴中以進行反轉錄。

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