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1. |
因倒立式共軛焦顯微鏡配備之高NA鏡頭均為短工作距離鏡頭,樣本需使用厚度約0.17mm之蓋玻片,過厚之蓋玻片將導致對焦困難或無法對焦。 |
2. |
活細胞樣本需使用拋棄式玻璃底dish(厚度0.17mm)或可重複使用之磁吸式細胞培養皿。 |
3. |
樣品蓋玻片不可滑動脫落,不可沾有任何溶劑、鹽類、鏡油等汙物以保護顯微鏡鏡頭。若不符合上述,請使用者現場處理或再預約上機。 |
4. |
上機前請先自行以螢光顯微鏡確認樣本品質達到可接受之訊噪比,螢光訊號無互相干擾或於可接受範圍,抗體專一性是否達最好或可接受之程度,一般初步觀察不可在本儀器進行,以免浪費時間佔用儀器。 |
5. |
為確認訊號正確性,請務必依檢體特性製備訊號對照組,例如:(1)未染色(評估檢體自體螢光)、(2)只有二級抗體染色檢體(評估二級抗體非特異性背景訊號)、(3)單色染色檢體(評估不同螢光間的訊號干擾)。 |
6. |
常見製備不佳樣本:
(1) |
螢光訊號太弱:一般螢光顯微鏡觀察時肉眼無法看到螢光訊號或觀察困難時表示訊號太弱,相較於以往,雖然共軛焦顯微鏡技術已提升(如新一代螢光染劑、較敏感的PMT、較佳的光學穿透率等),但因共軛焦顯微鏡成像原理僅收取pinhole過濾後之對焦面的訊號,太弱的螢光樣本將無法拍出品質良好的影像。 |
(2) |
訊號訊噪比不佳:建議調整染色條件或更換特異性較佳的抗體。 |
(3) |
螢光容易衰退:建議使用含螢光保護劑的封片膠。 |
(4) |
封片膠過多或過少:過多或過少的封片膠將導致焦平面不平整等問題,建議封片後直立玻片時不會輕易滑動的封片膠量為理想。 |
(5) |
染色全程應注意保持玻片濕潤,乾掉過的樣本將導致背景訊號。 |
(6) |
細胞或組織樣品型態不佳或脫落。 |
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