長庚婦產通訊--第24期
 
影像系統在人工生殖科技之應用-談Polscope之可能應用

陳俊凱

  長久以來,科學家一直想了解配子與胚胎細胞內的次級結構,常用的方式是使用免疫染色法。使用帶有螢光分子的特異性抗體,利用抗體抗原鏈結原理,螢光分子就會標記出該結構,在螢光顯微鏡下,該結構就無所遁形了。若想使呈像更精準時,則可用共軛焦顯微鏡。為了觀察更細微的結構,電子顯微鏡也提供了不少的資訊。經由這些方法,固然可以獲得想要的影像,但也犧牲了生物檢體,另外也無法觀察時間性的變化。例如在輔助人工生殖科技中,卵子紡錘體的構造是十分重要的,它是由微管(microtubules)構成的,試管嬰兒治療過程中,取出體外的成熟卵子是停頓在第二次減數分裂的中期,染色體排列在紡錘體的中央。經過精子受精活化卵子後,卵子會重新啟動停頓的減數分裂,紡錘體的微管牽引著染色體到欲分配的位置,卵子完成第二次減數分裂,第二極體也同時產生。由此可知,卵子紡錘體正常與否對於將來產生的胚胎正常與否有重要的關聯。以前若要觀察紡錘體的構造,必須使用螢光免疫染色法(如同上述方法),但是這顯然有如上所述的缺點。近來有所謂的Polscope的問世,改變了觀察的限制。

  Polscope的原理來自於傳統的偏光顯微鏡。傳統的偏光顯微鏡有兩個偏光器,一個偏光器在光路中的聚光鏡之前,另一個在物鏡之後。第一個偏光鏡(極化器)將光源的光線極化,通過標本,由第二個偏光器(分析器)來分析。通常兩個偏光器呈90°角,所以分析器會吸收掉(阻擋)大部分的光線,使得物鏡投射出來的影像是暗的;不過,標本中具有雙折射性質的部份就會顯得明亮。當雙折射軸平行於極化器或分析器時,雙折射性質的標本會顯得最暗,這時標本的位置為消失方位(extinction orientation),從消失方位轉45°角會使得雙折射性質的部位最亮。旋轉標本的角度,可以決定雙折射物質的消失方位。一般而言,不同部位具有不同的雙折射軸。

  除了偏光鏡外,偏光顯微鏡也在光的路徑上放置一個補償器(compensator)。補償器雖不是絕對必要的,但它可以強化微弱雙折射物質的訊號,使他們更容易被看見;補償器亦用來決定雙折射物質的兩個軸(slow axis and fast axis); 另外,補償器亦是定量物質的雙折射性質不可或缺的工具。

然而補償器如何定量物質的雙折射性質呢?遲滯性(Retardance)是偏光顯微鏡中補償器主要測量的單位。

R=△nd
R:遲滯性(Retardance
n:折射指數的差,即雙折射性的差別。
d:通過物質路徑的距離

有絲分裂紡錘體的平行微管束會造成的遲滯性在1/nm-數nm間。

  Polscope使用一種特殊的液態水晶裝置作為補償器,不同於傳統的補償器,液態水晶薄層兩面均覆蓋電極,當通上低伏特電流時,會改變液態水晶分子的排列,而改變電流強度時,分子排列方式也改變,雙折射性及遲滯性亦改變。Polscope即是基於傳統偏光鏡的原理,結合液態水晶遲滯器、現代電子影像儀器及電腦軟體而成的一套雙折射影像系統。

  由於紡錘體具雙折射性,所以目前Polscope在人工輔助生殖科技上主要的用途在於觀察卵子的紡錘體。研究報告顯示:在試管嬰兒的卵子體外受精過程中,若卵子在Polscope下可看到紡錘體時,則胚胎發育會較好,成功率也較高。在施行單一精子注射(ICSI)時,若可以看到紡錘體,則成功率也較高,是否是因為看到紡錘體可以避免傷害導致成功率較高,就不得而知了。

  另有使用Polscope的研究顯示,溫度的不穩定或突降,會導致卵子紡錘體的破壞及不易復原。林口長庚不孕症中心也利用此儀器來觀察卵子冰凍前後的紡錘體。初步經驗顯示在Polscope下,紡錘體形態好的卵子較能忍受冰凍的過程,且解凍後維持好形態紡錘體的比例較高。另外,Polscope可用作複製科技中,不須染色就可辨認紡錘體的利器。總之,Ploscope提供了一項不干擾卵子就可觀察紡錘體的工具,目前正朝其他有雙折射性物質,發展其應用的領域。

  以上僅是現代影像系統應用在輔助生殖科技之一個例子而已,或許將來會有觀察粒線體、觀察細胞骨架的影像系統問世,屆時對於輔助生殖科技的影響,是必又有一番騷動。

 
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