人類組織相容性試驗(HLA test)

 
一、簡介

人類白血球組織抗原系統(human leucocyte antigenHLA) 存在於人體所有的組織及有核細胞上,兼具多型性(polymorphism)及共顯性(codominant)。由數個基因控制,共同位於第六對染色體處HLA系統可區分為Class I loci (包括HLA-AHLA-BHLA-C) Class II loci (包括HLA-DRHLA-DPHLA-DQ)、及Class III loci。在臨床應用上,主要用於器官移植、骨髓移植之相容性檢驗、及血小板輸血之組織適合性。目前臨床研究證實,從HLA 相同的同胞獲得之移植物,其存活情形要比從單倍型相同之父母、同胞或無血源關係之來源獲得之移植物為佳

二、特色及原理

特色: 本實驗室之白血球抗原組織分型採用分生室是利用SSP (sequence specific primer)的原理做Low-resolution HLA DNA typing

原理: 利用完全配對的oligonucleotide primers (寡核酸配對引子)來放大標的序列(target sequence),配對引子(primer pairs)的設計完全針對單一allele或群體alleles,在PCR條件的控制下,只有在標的序列上有作用的配對引子(matched primer pairs)才會被放大出來(positive results);而不配對的引子(mismatched primer pairs)則不會被放大(negative results)PCR反應完成之後,被放大的DNA可利用agarose gel跑電泳分開,並以ethidium bromideDNA,接著在紫外線燈下可見PCR結果,所以判讀PCR-SSP的規則是藉由電泳後是否呈現特定大小的DNA片段而定。

三、品管

然而在PCR放大的過程中,有許多因素會影響PCR反應,如:pipetting誤差、DNA品質、抑制因子存在等,因而kit中設計有internal control primers,藉以觀察PCR反應的品質如何。此internal control primers設計在Human b-globin geneconserved region,存在於Kit中各個wells中,可藉以檢視各個PCR之反應品質。

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